外泌體提取試劑盒
外泌體（exosomes）是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的直徑大約為 30 ~ 150 nm 的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡。它廣泛存在并分布于各種體液中，攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子，形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng)，影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。
華美生物外泌體提取試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單可靠的方法可從細(xì)胞培養(yǎng)上清液，血清，血漿，乳液，尿液，唾液、酵母、植物中提取完整的外泌體。本產(chǎn)品提取的外泌體囊泡適用于下游的電鏡分析、NTA分析、納米流式（NanoFCM）分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測(cè)序等應(yīng)用。
方法對(duì)比
研究外泌體內(nèi)涵成分的前提是對(duì)其進(jìn)行高質(zhì)量的提取，由于外泌體粒徑較小且與多種其他生物分子混合在一起，導(dǎo)致其分離純化困難，阻礙了對(duì)其的進(jìn)一步研究。
近年來，研究人員根據(jù)外泌體理化性質(zhì)研發(fā)了多種分離純化方法：常用的有超速離心法、密度梯度超速離心法、超濾法、多聚物沉淀法（PEG）、免疫磁珠法、試劑盒分離法等。
而對(duì)于外泌體的分離，首先要關(guān)注外泌體的提取質(zhì)量，包括純度、囊泡狀態(tài)、得率及重復(fù)性等方面的評(píng)估，然后才是技術(shù)路線的選擇。
| 純化方法 |
外囊泡純度 |
囊泡狀態(tài) |
可操作性 |
回收量 |
重復(fù)性 |
設(shè)備要求 |
| 超速離心法 |
★★ |
★★ |
★★★ |
★★ |
★ |
超速離心機(jī) |
| 密度梯度離心法 |
★★★★ |
★★ |
★ |
★ |
★ |
超速離心機(jī) |
| 超濾法 |
★★ |
★★★ |
★★★ |
★★ |
★★ |
普通離心機(jī) |
| 多聚物沉淀法 |
★ |
★★ |
★★★★ |
★★★★ |
★★ |
普通離心機(jī) |
抗體親和純化
（磁珠） |
★★★ |
★ |
★★★ |
★★ |
★★★★ |
普通離心機(jī)+磁鐵架 |
華美生物
外泌體純化法 |
★★★ |
★★★ |
★★★ |
★★★ |
★★★★ |
普通離心機(jī)
(配套濃縮管) |
1. 超速離心法是最常用的外泌體純化手段，目前已發(fā)表文獻(xiàn)引用最多的方法，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。
優(yōu)點(diǎn)：無需特殊試劑，操作簡(jiǎn)便，適合大批量樣本。
缺點(diǎn)：耗時(shí)耗力，純度相對(duì)較低，回收率不穩(wěn)定，重復(fù)離心會(huì)一定程度損傷外泌體，設(shè)備要求高。
2. 密度梯度超速離心法是在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/mL的密度范圍富集。
優(yōu)點(diǎn)：純度相對(duì)較高，適合大批量樣本。
缺點(diǎn)：步驟繁瑣，耗時(shí)，回收率不穩(wěn)定，重復(fù)離心會(huì)一定程度損傷外泌體，設(shè)備要求高。
3. 超濾法是將溶劑及小分子物質(zhì)過濾到膜的另一側(cè)，而將相對(duì)大分子物質(zhì)截留在超濾膜上，以達(dá)到分離的目的。
優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單高效，不影響外泌體的完整性。
缺點(diǎn)：外泌體可能會(huì)阻塞過濾孔，導(dǎo)致膜的壽命減短，分離效率和純度較低。此外，截留在膜上的外泌體間也會(huì)發(fā)生粘附，導(dǎo)致產(chǎn)量降低。
4. 多聚物沉淀法根據(jù)化合物與外泌體的理化特性，利用共沉淀或者反向篩選的方式對(duì)外泌體進(jìn)行分離純化。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、無設(shè)備限制。
缺點(diǎn)：純度較低，存在假陽性（雜蛋白較多或一些難以去除的聚合物），機(jī)械力或化學(xué)添加物對(duì)外泌體產(chǎn)生破壞，存在于分離物中的聚合物也可能會(huì)干擾下游分析等。
5. 抗體親和（磁珠）法利用包被單克隆抗體的磁珠結(jié)合外泌體，外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。
優(yōu)點(diǎn)：純度較高，特異性和重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便、無設(shè)備限制。
缺點(diǎn)：效率和回收率較低，僅能捕獲表達(dá)特定抗原的目標(biāo)外泌體，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，囊泡完整性影響較大。
綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)的方法提取到的外泌體，缺陷在于：收率較低，耗時(shí)長(zhǎng)、純度不高，外泌體囊泡不完整等。
鑒于上述問題，武漢華美生物工程有限公司匠心研發(fā)的外泌體提取試劑盒通過蛋白親和的方式分離外泌體，無需超速離心即可實(shí)現(xiàn)高效率地從各種類型樣本中提取高純度、囊泡結(jié)構(gòu)完整的外泌體，具有簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、易操作的優(yōu)點(diǎn)。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
● 適用于各種樣品類型
CUSABIO外泌體提取試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單可靠的方法，可從細(xì)胞培養(yǎng)上清液，血清，血漿，乳液，尿液，唾液、酵母、植物中提取完整的外泌體。
- Exosomes extracted from plasma
- Exosomes extracted from serum
- Exosomes extracted from urine
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from Breast Milk
- Exosomes extracted from saliva
Exosomes extracted from Hela cells
Exosomes extracted from serum
Exosomes extracted from plasma
Exosomes extracted from Breast Milk
Exosomes extracted from saliva
Exosomes extracted from urine
Exosomes extracted from pichia pastoris
Exosomes extracted from kluyveromyces lactis
● 適用于各種細(xì)胞上清液中外泌體的分離提取
CUSABIO外泌體提取試劑盒可用于從各種細(xì)胞的上清液中分離外泌體，例如A375, Hela, HEPG2, MG63, Ntera-2, PC-3, Raji, U87, U251等。
- Exosomes extracted from A375 cells,
- A375 cell Lysate
- Exosomes extracted from HEPG2 cells
- Exosomes extracted from PC-3 cells
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from U87 cells
- Hela cell Lysate
- Exosomes extracted from MG63 cells
- Exosomes extracted from Ntera-2 cells
- MG63 cell Lysate
- Exosomes extracted from Raji cells
- Exosomes extracted from U251 cells
- Raji cell Lysate
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from urine
● 所提取的外泌體囊泡結(jié)構(gòu)完整，呈球形或碟形，顆粒均勻
Exosomes extracted from Breast Milk
Exosomes extracted from urine
Exosomes extracted from saliva
Exosomes extracted from pichia pastoris
● 高產(chǎn)量，單次提取，可獲得3*10^11個(gè)外泌體囊泡
CUSABIO (CSB-EI0102, CSB-EI0110)
粒徑大小：79.19 nm
顆粒濃度： 3.08*1011 個(gè) /mL
● 通過對(duì)比，華美試劑盒所提取的外泌體整體優(yōu)于其他三家知名品牌試劑盒，可與超速離心法相媲美
- CSB-EI0102(2T), CSB-EI0110(10T)
- Company A
- Company B
- Company C
- Ultracentrifugation
- Hela Cell Lysate
● 操作簡(jiǎn)單
● 無設(shè)備要求（不需要超速離心）
產(chǎn)品列表
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客戶評(píng)價(jià)
平均分:
4.8分 - 10個(gè)評(píng)價(jià)
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：提取尿液EV，并檢測(cè)所含RNA,主要是miRNA
樣品信息：晨尿，隨機(jī)尿
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：尿液所含的細(xì)胞外囊泡（EV）可能包含了膀胱癌細(xì)胞主動(dòng)分泌的miRNA,通過檢測(cè)EV中特定miRNA峰度的變化，可能識(shí)別早期癌癥。Cusabio外泌體提取試劑盒分離尿液中的EV；一部分EV提取RNA、反轉(zhuǎn)錄、qPCR檢測(cè)內(nèi)參靶標(biāo)；另一部分EV簡(jiǎn)單處理后直接反轉(zhuǎn)錄、qPCR檢測(cè)。CUSABIO試劑盒提取結(jié)果不錯(cuò)。
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：qPCR
樣品信息：細(xì)胞上清
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：提取外泌體效果還不錯(cuò)！
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：TEM
樣品信息：細(xì)胞上清液-濃縮5倍-500微升-400ul洗脫-又超濾濃縮至20ul
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：能清楚看到外泌體，完整、清晰，但是由于不清楚1T可以提取最多50ml細(xì)胞上清這件事，導(dǎo)致使用太少細(xì)胞上清液，提取的外泌體太少。
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：WB
樣品信息：腦組織
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：所提取外泌體進(jìn)行了WB檢測(cè)標(biāo)志蛋白CD9，電鏡未做，但內(nèi)參蛋白發(fā)光時(shí)未見，原因未知。但在提取過程時(shí)確實(shí)非常方便，不需要超速離心。值得推薦~
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：WB
樣品信息：細(xì)胞上清
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：提取到目標(biāo)蛋白分子，WB條帶也比較清晰~
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：qPCR
樣品信息：細(xì)胞上清
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：提取外泌體效果還不錯(cuò)！
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：WB
樣品信息：胰腺癌細(xì)胞上清外泌體提取
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：所提取外泌體較為純正，步驟簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。目前就是從提取的外泌體里面發(fā)現(xiàn)有我的目標(biāo)分子。
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：qRT-PCR驗(yàn)證lncRNA的存在及表達(dá)
樣品信息：25ml MHCC97H肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)基上清
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：結(jié)果所示為 試劑盒所提取外泌體的lncRNA擴(kuò)增曲線以及擴(kuò)增的CT值。
總體來說，提取外泌體總共需要花費(fèi)時(shí)間并不多，過程較為簡(jiǎn)單，只是有一處稍有疑惑。濃縮的0.75ml的上清在進(jìn)行0.45um膜進(jìn)行過濾時(shí)，量太少不太好進(jìn)行過濾，我是往里打空氣，但總會(huì)有損失。這一步驟不過濾可否。
貴公司試劑盒regentA為乳狀物，上層為上清，很難混勻，吸取的時(shí)候乳狀液較難吸上。望這一步驟說明進(jìn)行解釋說明。
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：WB/電鏡
樣品信息：血清，1mL
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：WB條帶特異，電鏡結(jié)果顯示結(jié)構(gòu)完成，有典型的外泌體形狀呈現(xiàn)，結(jié)果比預(yù)期好不少！值得推薦~
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：電鏡/NTA
樣品信息：中段晨尿，15ml
產(chǎn)品評(píng)價(jià)：所提取的外泌體結(jié)構(gòu)完成，呈典型的茶托裝，平均粒徑69nm，濃度達(dá)到10^10 Particles/mL以上，結(jié)果良好
常見問題
1、如何保存純化獲得的外泌體囊泡？
答：短時(shí)間內(nèi)保存于4℃，長(zhǎng)時(shí)間保存需要放置于-80℃（建議分裝后保存、避免反復(fù)凍融）
2、如何獲得無外泌體血清培養(yǎng)細(xì)胞？
答：a、將細(xì)胞培養(yǎng)用的血清通過超速離心10h以去除血清中外泌體（無菌操作）；
b、可選擇無血清培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；
c、可選擇去外泌體血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
3、如何確認(rèn)所提取到的是外泌體？
答：可以通過特定標(biāo)志物的WB驗(yàn)證，電鏡、粒徑（納米流式、NTA）等方式來確認(rèn)。
4、與超速離心相比，我們的優(yōu)點(diǎn)是什么？
答：與超速離心相比，可以簡(jiǎn)便的、穩(wěn)定的、高重復(fù)性的實(shí)現(xiàn)外泌體的回收，且沒有儀器設(shè)備的限制。
研究發(fā)展
外泌體爆炸性研究活動(dòng)已經(jīng)慢慢演變?yōu)榉肿俞t(yī)學(xué)的快速發(fā)展。外泌體在臨床醫(yī)學(xué)中有十分光明的應(yīng)用前景，主要是因?yàn)樗鼈兒胸S富的生物標(biāo)志物，可用于監(jiān)測(cè)臨床狀態(tài)、診斷疾病、治療反應(yīng)、疾病進(jìn)展等。重要且有影響力外泌體研究領(lǐng)域會(huì)隨著高效率的外泌體分離技術(shù)的發(fā)展而發(fā)展。
外泌體可作為生物標(biāo)志物用于疾病的診斷，也推動(dòng)了以外泌體為靶標(biāo)的治療方法研究或?qū)⑼饷隗w本身用作治療工具的研究。將外泌體用作治療工具的臨床研究正在開展之中，其目的是研究患者自身MSC分泌外泌體或健康捐贈(zèng)者體內(nèi)外泌體用于治療的安全性和有效性。這個(gè)趨勢(shì)下，外泌體用作藥物輸送系統(tǒng)作為基因治療的潛在載體有可能變得更加普遍。外泌體在癌癥中同時(shí)發(fā)揮免疫激活和免疫抑制功能，外泌體腫瘤免疫療法有望誕生抗癌疫苗。
外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破，理論上能夠從外泌體中檢測(cè)到DNA序列變異、RNA的表達(dá)變化、蛋白質(zhì)變化等。要將其用于臨床治療，外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先，對(duì)外泌體的具體合成機(jī)制、功能了解并不是非常詳細(xì)。其次，存在外泌體分離技術(shù)、分離量、及檢測(cè)技術(shù)的挑戰(zhàn)，外泌體在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用還需要加強(qiáng)和深入研究。然而，雖然當(dāng)前外泌體生物學(xué)仍然不成熟，但越來越多的興趣和資金投入必將加速外泌體基礎(chǔ)研究進(jìn)展和臨床轉(zhuǎn)化。
